TIMP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400408

Übersicht

TIMP1 kodiert den Gewebeinhibitor von Metalloproteinasen 1 (TIMP‑1), ein sezerniertes Glykoprotein, das an Matrix-Metalloproteinasen bindet und sie hemmt, um den Umsatz der extrazellulären Matrix und proteolytische Signalprozesse zu regulieren. Durch die Begrenzung der MMP-Aktivität beeinflusst TIMP‑1 Zell–Matrix-Interaktionen, Gewebeumbau und Entzündungsreaktionen, mit nachgelagerten Effekten auf Migration, Invasion und zytokingetriebene Umbauprogramme. TIMP‑1 ist zudem an MMP-unabhängiger Signalübertragung über Zelloberflächen-Interaktionen beteiligt, die kontextabhängig Überlebens- und Proliferationswege modulieren können. Eine veränderte TIMP1-Expression und das Gleichgewicht zwischen TIMP‑1 und MMP werden häufig in der Forschung zu Fibrose, Arthritis, kardiovaskulärem Remodeling und Krebsbiologie untersucht, wo eine dysregulierte Matrixdynamik zu krankheitsassoziierten Phänotypen beiträgt.

Das TIMP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TIMP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TIMP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TIMP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TIMP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TIMP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TIMP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TIMP1-Exone abzielen, die für die TIMP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TIMP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TIMP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TIMP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TIMP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TIMP-1 HDR-Plasmid (h) und TIMP-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TIMP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TIMP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.