Plasmide CRISPR d'Activation (m) TIMP-1: sc-423402-ACT

Le gène murin **Timp1** code l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases-1 (**TIMP-1**), une glycoprotéine sécrétée qui se lie à plusieurs métalloprotéinases de la matrice (MMP) et les inhibe, afin de réguler le renouvellement de la matrice extracellulaire et la protéolyse péricellulaire. En contrôlant l’activité des MMP, TIMP-1 influence l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que les processus de remodelage tissulaire, en interaction avec la signalisation inflammatoire et les programmes de réparation des plaies. L’activité de TIMP-1 est couramment étudiée dans des contextes de fibrose, d’inflammation chronique et de remodelage du microenvironnement tumoral, où un déséquilibre entre protéases et inhibiteurs contribue à une déposition aberrante de matrice et à l’invasion cellulaire. En tant que régulateur extracellulaire multifonctionnel, TIMP-1 sert également aux études mécanistiques de l’angiogenèse et du dialogue stroma–système immunitaire dans des modèles murins.

TIMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Timp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Timp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Timp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIMP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Timp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIMP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIMP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Timp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.