Tim13A/B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408855

Descripción general

TIMM13 codifica la chaperona pequeña Tim13A/B del espacio intermembrana mitocondrial, que coopera con TIMM8A/TIMM8B para escoltar proteínas precursoras hidrofóbicas desde el complejo TOM hasta la maquinaria de inserción en la membrana interna. Esta vía sostiene la fosforilación oxidativa al favorecer la biogénesis adecuada de transportadores de la membrana interna y de otras proteínas multipaso, vinculando la función de TIMM13 con la importación de proteínas mitocondriales, el mantenimiento del potencial de membrana y la proteostasis. La alteración de las redes de chaperonas pequeñas Tim puede contribuir a disfunción mitocondrial, aumento de respuestas celulares al estrés y deterioro del metabolismo energético, procesos que se investigan con frecuencia en estudios de neurodegeneración y metabolismo del cáncer. Por lo tanto, TIMM13 es relevante para la investigación sobre control de calidad mitocondrial, homeostasis de la cadena respiratoria y señalización adaptativa al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tim13A/B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TIMM13 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TIMM13 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TIMM13 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tim13A/B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TIMM13 para la investigación de la señalización de Tim13A/B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TIMM13 críticos para la función de Tim13A/B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TIMM13 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Tim13A/B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Tim13A/B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TIMM13. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tim13A/B (h) y el plásmido HDR Tim13A/B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TIMM13 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TIMM13 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.