Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) TIGAR: sc-401390-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TIGAR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TIGAR (h) y el plásmido de doble nickasa TIGAR (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TIGAR. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TIGAR Anticuerpo (E-2): sc-166290
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TIGAR | sc-401390-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TIGAR | sc-401390-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El TIGAR humano (regulador de la glucólisis y la apoptosis inducido por TP53) codifica una proteína similar a una fructosa-2,6-bisfosfatasa que reprograma el metabolismo celular al disminuir la fructosa-2,6-bisfosfato, suprimir el flujo glucolítico y favorecer la actividad de la vía de las pentosas fosfato. Al aumentar la generación de NADPH, TIGAR sostiene la homeostasis redox y limita las especies reactivas de oxígeno, vinculando el control metabólico con las respuestas al estrés y con programas de apoptosis y autofagia aguas abajo de la señalización de p53. TIGAR se ha estudiado en contextos de reprogramación metabólica y adaptación al estrés oxidativo que son relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos en los que el equilibrio redox y la bioenergética influyen en el destino celular. Como regulador nodal en la intersección de la señalización de p53, la glucólisis y las defensas antioxidantes, TIGAR ofrece una diana accesible para diseccionar fenotipos dependientes del metabolismo en células humanas.
TIGAR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TIGAR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TIGAR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TIGAR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TIGAR alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.