TIF1γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403230-ACT

TRIM33 (TIF1γ) codifica um correagulador transcricional contendo motivo tripartido, que integra a atividade de ligase de ubiquitina associada à cromatina com a regulação gênica dependente de sinais. O TIF1γ modula a sinalização de TGF-β/BMP mediada por SMAD, influencia o alongamento da transcrição e o remodelamento da cromatina, e participa de respostas a danos no DNA por meio da regulação de complexos proteicos nucleares. Ao ajustar programas transcricionais específicos de linhagem e decisões de destino celular, o TRIM33 é estudado em contextos como diferenciação hematopoética, transição epitélio-mesênquima e redes de sinalização de estresse. A desregulação da função de TRIM33 e alterações na saída da via de TGF-β têm sido associadas à biologia tumoral e a outros distúrbios que envolvem controle transcricional aberrante.

TIF1γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM33 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIF1γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM33 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM33, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIF1γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM33 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIF1γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIF1γ em células tumorais com expressão de TRIM33 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.