Plasmide CRISPR/Cas9 KO THUMPD3 (m): sc-420731

Présentation

Thumpd3 code pour THUMPD3, une protéine contenant un domaine THUMP impliquée dans des fonctions de liaison à l’ARN, qui soutiennent le métabolisme de l’ARN et la régulation post‑transcriptionnelle. Les domaines THUMP sont couramment associés à des enzymes de modification des tRNA/rRNA et sont liés à des processus qui influencent la biogenèse des ribosomes, la fidélité de la traduction et les réponses cellulaires au stress. Dans les systèmes murins, la perturbation du traitement de l’ARN et du contrôle traductionnel peut affecter les programmes de prolifération et de différenciation, ce qui fait de THUMPD3 une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie de l’expression génique. Les altérations des voies de modification et de traitement de l’ARN sont largement associées à des phénotypes en neurodéveloppement, en régulation métabolique et en biologie du cancer, fournissant un contexte mécanistique pour l’exploration des réseaux dépendants de THUMPD3.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO THUMPD3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Thumpd3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Thumpd3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Thumpd3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine THUMPD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Thumpd3 pour l'étude de la signalisation de THUMPD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Thumpd3 essentiels à la fonction de THUMPD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Thumpd3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le THUMPD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le THUMPD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Thumpd3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le THUMPD3 plasmide HDR (m) et le THUMPD3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Thumpd3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Thumpd3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.