Plásmido CRISPR de Activación (h) THAP1: sc-405020-ACT

THAP1 codifica un factor de transcripción de unión al ADN que contiene un dominio THAP y que regula programas de expresión génica vinculados al control del ciclo celular, la represión transcripcional asociada a la cromatina y la función neuronal. Se ha descrito que THAP1 interactúa con cofactores nucleares e influye en vías que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la apoptosis mediante la regulación, específica de promotores, de genes diana. En el sistema nervioso, la actividad de THAP1 se ha implicado en el mantenimiento de la homeostasis transcripcional y de la organización nuclear, y su desregulación se asocia con fenotipos de distonía hereditaria. Como regulador transcripcional, THAP1 constituye un nodo útil para estudiar cómo la unión específica a secuencias de ADN y el reclutamiento de cofactores moldean las redes génicas posteriores.

THAP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de THAP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

THAP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus THAP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional THAP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de THAP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo THAP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de THAP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía THAP1 en células tumorales con expresión de THAP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.