Particules Lentivirales d'Activation (h) TGIF: sc-401472-LAC

Le gène humain **TGIF1** code **TGIF**, un corépresseur transcriptionnel à homéoboîte TALE qui module les programmes d’expression génique au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. TGIF s’intègre à la signalisation **TGF-β/SMAD** en se liant aux complexes **SMAD2/3** et en recrutant la machinerie de corépresseurs afin d’ajuster finement les réponses transcriptionnelles, influençant ainsi les décisions de destinée cellulaire, la transition épithélio-mésenchymateuse et la différenciation. Il interagit également avec des réseaux transcriptionnels dépendants de l’acide rétinoïque et, plus largement, avec des processus de régulation de la chromatine qui façonnent la morphogenèse. Une activité ou une expression dérégulée de TGIF1 a été associée à des phénotypes développementaux congénitaux et a été étudiée dans le contexte d’un remodelage transcriptionnel oncogénique et d’une sortie anormale de la voie TGF-β.

Les particules d'activation lentivirales TGIF (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TGIF1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TGIF (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TGIF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TGIF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TGIF1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.