TGase6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404254-ACT

Das humane TGM6-Gen kodiert die Transglutaminase 6 (TGase6), ein Ca2+-abhängiges Enzym, das Proteinvernetzung und Transamidierungsreaktionen katalysiert, welche die Proteinstabilität, die Organisation der extrazellulären Matrix und die Zytoskelettdynamik modulieren. Durch die Regulation von Protein-Protein-Interaktionen und posttranslationalen Modifikationen kann TGase6 Signalwege beeinflussen, die mit Zelladhäsion, Differenzierung und Stressantworten verknüpft sind. Die Expression von TGM6 und die Aktivität der TGase-Familie wurden im Kontext der neuralen und epithelialen Biologie untersucht, wobei eine veränderte Homöostase der Proteinvernetzung die Proteostase sowie die Zell-Matrix-Signalübertragung beeinträchtigen kann. Eine Fehlregulation von TGase6 wurde mit neurobiologisch relevanten Phänotypen und krankheitsassoziierten molekularen Signaturen in Verbindung gebracht, was ihre Eignung als Ziel für mechanistische Studien zur transkriptionellen Kontrolle und zur nachgeschalteten Umgestaltung von Signalwegen unterstreicht.

TGase6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TGM6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TGase6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TGM6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TGM6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TGase6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TGM6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TGase6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TGase6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TGM6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.