TFPI-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423362

Panoramica

Tfpi2 codifica l’inibitore della via del fattore tissutale 2 (TFPI-2), un inibitore secretorio delle serin-proteasi di tipo Kunitz che modula la proteolisi extracellulare inibendo proteasi come la plasmina ed enzimi di tipo tripsina. Nei tessuti murini, TFPI-2 contribuisce a regolare il turnover della matrice extracellulare, l’attività proteasica pericellulare e le interazioni cellula–matrice che influenzano adesione, migrazione e rimodellamento tissutale. Limitando le cascate proteolitiche legate a coagulazione e fibrinolisi e interfacciandosi con il rimodellamento guidato dalle metalloproteinasi della matrice, TFPI-2 contribuisce all’omeostasi vascolare e stromale. Un’alterata espressione o attività di TFPI-2 è stata associata a una degradazione deregolata della matrice e a fenotipi cellulari invasivi rilevanti per la fibrosi, la patologia vascolare e la biologia dei tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TFPI-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tfpi2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tfpi2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tfpi2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TFPI-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tfpi2 per lo studio della segnalazione di TFPI-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tfpi2 critici per la funzione di TFPI-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tfpi2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tfpi2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TFPI-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TFPI-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tfpi2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tfpi2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.