TFIIIC90 Double Nickase Plasmid (h): sc-411269-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFIIIC90 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFIIIC90 Double-Nickase-Plasmid (h) und TFIIIC90 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GTF3C4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFIIIC90 Double Nickase Plasmid (h) | sc-411269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIIC90 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane GTF3C4 kodiert TFIIIC90, eine zentrale Untereinheit des TFIIIC‑Komplexes, der interne Promotorelemente in Genen erkennt, die von der RNA‑Polymerase III transkribiert werden, darunter tRNAs und andere kleine nichtkodierende RNAs. Durch die Unterstützung des Aufbaus der Pol‑III‑Präinitiationsmaschinerie und die Beeinflussung der Chromatinorganisation an Pol‑III‑Loci trägt TFIIIC90 zur Homöostase kleiner RNAs, zur Translationskapazität und zur Koordination übergeordneter transkriptioneller Netzwerke bei. Die TFIIIC‑abhängige Regulation überschneidet sich mit der Kontrolle des Zellwachstums, Stressantworten und der Genomarchitektur, unter anderem durch Funktionen an repetitiven Elementen sowie durch Barriere-/Insulator‑ähnliche Wirkungen in bestimmten genomischen Kontexten. Eine Fehlregulation von Pol‑III‑Transkriptionsprogrammen und TFIIIC‑Komponenten wurde mit proliferativen Phänotypen und verändertem RNA‑Metabolismus in Verbindung gebracht, was TFIIIC90 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in krebsrelevanten und ribostasebezogenen Signalwegen macht.
TFIIIC90 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GTF3C4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GTF3C4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GTF3C4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GTF3C4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.