TFIIIB90-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405826-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFIIIB90-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFIIIB90-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TFIIIB90-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BRF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TFIIIB90-1/2/3/5: sc-390821
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFIIIB90-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405826-NIC | 20 µg | $410.00 |
BRF1 kodiert TFIIIB90-1, eine zentrale Untereinheit des RNA-Polymerase-III-Transkriptionsfaktors TFIIIB, der mit TBP und BDP1 zusammenwirkt, um Pol III an Promotoren von tRNA-Genen, 5S-rRNA und weiteren Loci kleiner nichtkodierender RNAs zu positionieren. Durch die Kontrolle der Pol-III-Initiation beeinflusst TFIIIB90-1 die Ribosomenbiogenese, die Translationkapazität und zelluläre Wachstumsprogramme und verknüpft damit Nährstoffsensorik sowie stressresponsive Transkriptionsregulation mit Proliferation. Eine dysregulierte Pol-III-Aktivität und veränderte Aktivität von TFIIIB-Komponenten wurden in verschiedenen Kontexten mit onkogener Transformation und veränderter Proteostase in Verbindung gebracht, wodurch BRF1 einen nützlichen Ansatzpunkt zur Analyse der transkriptionellen Kontrolle biosynthetischer Signalwege darstellt. Funktionelle Studien zu BRF1 überschneiden sich häufig mit Chromatinregulation an Pol-III-Promotoren, Zellzyklusprogression und metabolischer Signalgebung, die den Transkriptionsdurchsatz von Pol III moduliert.
TFIIIB90-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BRF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BRF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BRF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BRF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.