Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TFIIIB′′ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436781
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFIIIB″ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TFIIIB″, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BDP1 Antibody (B-6): sc-515058
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFIIIB′′ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-436781 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Bdp1 codifica la subunità murina TFIIIB″, un componente centrale del macchinario di trascrizione dell’RNA polimerasi III che coopera con TBP e con le proteine BRF per assemblare TFIIIB sui promotori di Pol III. TFIIIB″ sostiene l’inizio e la re-iniziazione della trascrizione dipendente da Pol III di tRNA, rRNA 5S e di altri piccoli RNA non codificanti, collegando l’attività di Bdp1 alla capacità traduttiva, alla proteostasi e al controllo della crescita cellulare. Poiché l’output di Pol III è strettamente accoppiato al sensing dei nutrienti e alle risposte allo stress, l’alterazione di Bdp1 può influenzare la progressione del ciclo cellulare e l’adattamento metabolico. La trascrizione di Pol III deregolata e la funzione di TFIIIB alterata sono spesso studiate in contesti di disturbi proliferativi e di vie legate alla stabilità del genoma, rendendo Bdp1 un bersaglio utile per studi meccanicistici nelle cellule dei mammiferi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIIB″ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bdp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bdp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bdp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TFIIIB″.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bdp1 per lo studio della segnalazione di TFIIIB″, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Bdp1 critici per la funzione di TFIIIB″
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bdp1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TFIIIB″ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TFIIIB″ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bdp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TFIIIB″ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TFIIIB″ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bdp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bdp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.