Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TFIIIB′′ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436781
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TFIIIB″ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TFIIIB″, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BDP1 Anticuerpo (B-6): sc-515058
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TFIIIB′′ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-436781 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Bdp1 codifica la subunidad TFIIIB″ del ratón, un componente central de la maquinaria de transcripción de la ARN polimerasa III que coopera con TBP y las proteínas BRF para ensamblar TFIIIB en los promotores de la Pol III. TFIIIB″ favorece el inicio y reinicio de la transcripción dependiente de Pol III de ARNt, ARNr 5S y otros ARN pequeños no codificantes, vinculando la actividad de Bdp1 con la capacidad de traducción, la proteostasis y el control del crecimiento celular. Dado que la producción de Pol III está estrechamente acoplada a la detección de nutrientes y a las respuestas al estrés, la alteración de Bdp1 puede influir en la progresión del ciclo celular y la adaptación metabólica. La transcripción de Pol III desregulada y la función alterada de TFIIIB se estudian con frecuencia en contextos de trastornos proliferativos y de vías de estabilidad genómica, lo que convierte a Bdp1 en una diana útil para estudios mecanísticos en células de mamífero.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TFIIIB″ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Bdp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Bdp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Bdp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TFIIIB″.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Bdp1 para la investigación de la señalización de TFIIIB″, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Bdp1 críticos para la función de TFIIIB″
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Bdp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TFIIIB″ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TFIIIB″ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Bdp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TFIIIB″ (m) y el plásmido HDR TFIIIB″ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Bdp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Bdp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.