Plasmide CRISPR/Cas9 KO TFEC (h): sc-406102

Présentation

TFEC (transcription factor EC) code un facteur de transcription à hélice‑boucle‑hélice basique avec fermeture éclair à leucines (bHLH‑LZ) de la famille MiT/TFE, qui se lie aux motifs E‑box afin de réguler des programmes géniques restreints à certaines lignées cellulaires. Il est surtout étudié dans la biologie de la lignée myéloïde et des cellules pigmentaires, où il peut influencer l’état de différenciation et des réseaux transcriptionnels qui croisent la signalisation immunitaire et les réponses au stress cellulaire. L’activité de TFEC contribue au contrôle de sorties transcriptionnelles impliquées dans l’identité cellulaire et l’adaptation aux signaux environnementaux. Des programmes transcriptionnels dérégulés de la famille MiT/TFE, y compris des réseaux associés à TFEC, ont été impliqués dans une différenciation aberrante et des signatures d’expression génique liées au cancer, ce qui soutient des études mécanistiques dans des contextes d’oncogenèse et d’immunobiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TFEC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TFEC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TFEC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TFEC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TFEC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TFEC pour l'étude de la signalisation de TFEC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TFEC essentiels à la fonction de TFEC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TFEC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TFEC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TFEC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TFEC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TFEC plasmide HDR (h) et le TFEC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TFEC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TFEC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.