Plásmido Doble Nickase (h) TF: sc-401060-NIC

El gen F3 humano codifica el factor tisular (TF), un iniciador transmembrana de la vía extrínseca de la coagulación que forma un complejo con el factor VII/VIIa para desencadenar la generación posterior de trombina y la formación de fibrina. Más allá de la hemostasia, la señalización proteasa dependiente de TF se entrecruza con la activación de los receptores activados por proteasas (PAR), las respuestas inflamatorias, la angiogénesis y las interacciones endotelio–monocito que moldean la biología vascular. La expresión de F3 está estrictamente regulada por señales de citocinas y de estrés, y se estudia con frecuencia en el contexto de la trombosis, la aterosclerosis, la coagulopatía asociada a sepsis y la actividad procoagulante vinculada al microambiente tumoral. Estas funciones hacen de TF un nodo útil para desentrañar el diálogo cruzado entre la coagulación y las vías de señalización de la inmunidad innata.

TF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus F3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de F3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de F3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con F3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.