TESPA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406563

Übersicht

TESPA1 (thymocyte-expressed, positive selection-associated 1) kodiert ein in lymphoiden Zellen angereichertes Adapterprotein, das die Signaltransduktion nachgeschaltet an Antigenrezeptoren koordiniert. In T‑Zellen trägt TESPA1 zur proximalen TCR‑Signalgebung und zur Calcium‑Mobilisierung bei, indem es die Rezeptoraktivierung mit PLCγ‑abhängigen Signalwegen und der Ca²⁺‑Freisetzung aus dem endoplasmatischen Retikulum verknüpft und so Aktivierungsprogramme sowie die Selektion von Thymozyten mitprägt. TESPA1 ist zudem an der Signalübertragung des B‑Zell‑Rezeptors beteiligt und in umfassendere Kommunikationsnetzwerke von Immunzellen eingebunden, die Zytokinantworten und Differenzierung beeinflussen. Eine veränderte TESPA1‑Aktivität wurde mit Phänotypen der Immunfehlregulation in Verbindung gebracht, darunter eine erhöhte Anfälligkeit für Autoimmun‑ und Entzündungsmechanismen, was TESPA1 für die Untersuchung von Signal‑Schwellenwerten und der Lymphozytenfunktion relevant macht.

Das TESPA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TESPA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TESPA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TESPA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TESPA1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TESPA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TESPA1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TESPA1-Exone abzielen, die für die TESPA1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TESPA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TESPA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TESPA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TESPA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TESPA1 HDR-Plasmid (h) und TESPA1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TESPA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TESPA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.