Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tenascin-C: sc-400663-ACT

TNC code la ténascine‑C, une grande glycoprotéine de la matrice extracellulaire dont l’expression est dynamique au cours du développement, du remodelage tissulaire et des réponses inflammatoires. La ténascine‑C module l’adhésion cellulaire, la migration et la mécanotransduction en interagissant avec les intégrines, les syndécanes et d’autres composants de la matrice, influençant ainsi la signalisation des adhésions focales et l’organisation du cytosquelette. Elle façonne la niche extracellulaire et peut réguler la disponibilité des facteurs de croissance, contribuant à des processus tels que la transition épithélio‑mésenchymateuse, le remodelage angiogénique et le trafic des cellules immunitaires. Une expression dérégulée de TNC et des dépôts anormaux de matrice sont associés à la fibrose et au remodelage stromal lié aux tumeurs, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire utile pour étudier le comportement cellulaire guidé par le microenvironnement.

Tenascin-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tenascin-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tenascin-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tenascin-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tenascin-C dans les cellules tumorales présentant une expression de TNC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.