Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO TdT (h): sc-406822
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TdT Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TdT, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TdT Antibody (C-11): sc-393710
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TdT (h) | sc-406822 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DNTT code la transférase terminale désoxynucléotidyle (TdT), une ADN polymérase spécialisée qui ajoute des nucléotides non matrice aux intermédiaires de recombinaison V(D)J au cours du développement des lymphocytes. En augmentant la diversité jonctionnelle aux loci des immunoglobulines et des récepteurs des cellules T, TdT façonne les répertoires des récepteurs antigéniques et contribue à la spécificité de l’immunité adaptative. L’activité de TdT est étroitement liée aux processus de réparation des cassures double brin de l’ADN et aux événements de jonction d’extrémités survenant au niveau des séquences signales de recombinaison. L’expression aberrante de DNTT est largement utilisée comme marqueur d’états lymphoïdes immatures et est fréquemment étudiée dans le contexte de la leucémogenèse, de l’instabilité génomique et de la spécification de lignée.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TdT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNTT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNTT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNTT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TdT.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNTT pour l'étude de la signalisation de TdT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DNTT essentiels à la fonction de TdT
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNTT pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TdT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TdT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNTT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TdT plasmide HDR (h) et le TdT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNTT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNTT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.