TDO2 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-402482-LAC-2

Das humane TDO2 (Tryptophan-2,3-Dioxygenase) kodiert ein hämabhängiges Enzym, das den ersten und geschwindigkeitsbestimmenden Schritt des Tryptophanabbaus über den Kynureninweg katalysiert und dadurch die zelluläre Verfügbarkeit von Tryptophan sowie die nachgeschaltete Bildung immunmodulatorischer und neuroaktiver Metaboliten reguliert. Die TDO2-Aktivität verknüpft Nährstoffsensorik und die metabolische Homöostase der Leber mit dem Redoxgleichgewicht und Signalnetzwerken, die durch Kynurenine beeinflusst werden, was Konsequenzen für Immunregulation, Stressantworten und den Fluss von Neurotransmittervorstufen hat. Eine dysregulierte TDO2-Expression oder ein veränderter Output des Signalwegs wurde mit immunologischer Tumorevasion, entzündlichen Erkrankungen sowie neuropsychiatrischen oder neurodegenerativen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, in denen ein veränderter Tryptophan–Kynurenin-Stoffwechsel beobachtet wird. Geneditierung von TDO2 unterstützt mechanistische Studien zur metabolischen Umprogrammierung, zur kynureninabhängigen Signalgebung und zu Interaktionen zwischen Tumorzellen, Hepatozyten und Immunzellen in relevanten humanen Zellmodellen.

TDO2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TDO2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TDO2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TDO2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TDO2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TDO2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.