Plasmide CRISPR/Cas9 KO TDO2 (h): sc-402482

Présentation

La TDO2 (tryptophane 2,3-dioxygénase) est une enzyme hème-dépendante qui catalyse la première étape, limitante en vitesse, de la dégradation du tryptophane via la voie de la kynurénine, en convertissant le L-tryptophane en N-formylkynurénine. En contrôlant la disponibilité intracellulaire du tryptophane et les métabolites en aval de la kynurénine, la TDO2 influence l’homéostasie métabolique cellulaire et peut moduler la signalisation via des voies sensibles à la déplétion en acides aminés et à des programmes transcriptionnels induits par des métabolites, notamment l’activité du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR). L’expression de la TDO2 est surtout marquée dans le foie, mais elle est également étudiée dans des contextes extra-hépatiques où une altération du catabolisme du tryptophane affecte l’équilibre rédox, le flux de précurseurs du NAD+ et le dialogue immuno-métabolique. Une dérégulation de l’activité de la voie de la kynurénine impliquant la TDO2 a été associée à l’inflammation et au remodelage métabolique lié au cancer, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques du microenvironnement tumoral et de l’immunométabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TDO2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TDO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TDO2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TDO2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TDO2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TDO2 pour l'étude de la signalisation de TDO2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TDO2 essentiels à la fonction de TDO2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TDO2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TDO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TDO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TDO2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TDO2 plasmide HDR (h) et le TDO2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TDO2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TDO2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.