Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TDG Plasmide Double Nickase (h): sc-416599-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TDG Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TDG Double Nickase Plasmid (h) e il TDG Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TDG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TDG Antibody (D-11): sc-376652
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TDG Plasmide Double Nickase (h) | sc-416599-NIC | 20 µg | $410.00 |
La timidina DNA glicosilasi (TDG) è un enzima della riparazione per escissione di basi (base excision repair, BER) che rimuove timidina o uracile da appaiamenti errati G:T e G:U derivanti dalla deaminazione della 5-metilcitosina, contribuendo a preservare l’integrità del genoma. Oltre alla riparazione canonica, TDG partecipa alla demetilazione attiva del DNA processando derivati ossidati della 5-metilcitosina in collaborazione con gli enzimi TET, collegandosi così alla regolazione epigenetica della trascrizione. Attraverso queste attività, TDG influenza la riparazione accoppiata alla replicazione e alla trascrizione, lo stato della cromatina e le risposte cellulari al danno al DNA. Alterazioni della funzione o della regolazione di TDG sono frequentemente studiate nel contesto del carico mutazionale, dell’instabilità dell’epigenoma e dei programmi di espressione genica associati al cancro.
TDG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TDG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TDG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TDG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TDG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.