Plásmido Doble Nickase (h) TDAG8: sc-416613-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TDAG8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TDAG8 (h) y el plásmido de doble nickasa TDAG8 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GPR65. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TDAG8 | sc-416613-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TDAG8 | sc-416613-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El GPR65 humano codifica TDAG8, un receptor acoplado a proteína G sensible a protones, enriquecido en contextos inmunitarios y hematopoyéticos, que se acopla principalmente a Gs y a la señalización de AMPc en respuesta a la acidosis extracelular. TDAG8 integra señales dependientes del pH dentro de microambientes inflamatorios, influyendo en la activación de leucocitos, los programas de citocinas y las decisiones de supervivencia celular, y se relaciona con vías más amplias impulsadas por GPCR que modulan MAPK y respuestas transcripcionales. La regulación alterada de GPR65 se ha investigado en condiciones caracterizadas por acidosis tisular y señalización inmunitaria desregulada, incluidos escenarios inflamatorios y autoinmunes, así como en la biología del microambiente tumoral. Estas características hacen de TDAG8 un punto de entrada útil para estudiar cómo el pH extracelular remodela las redes de señalización y el comportamiento de las células inmunitarias.
TDAG8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPR65 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPR65. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPR65. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPR65 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.