TDAG8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416613

Übersicht

GPR65 kodiert TDAG8, einen protonensensitiven G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der eine extrazelluläre Azidifizierung erkennt und Signale über cAMP/PKA sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme weiterleitet. TDAG8 ist vor allem im Immun- und hämatopoetischen Kontext angereichert, wo es Entzündungsreaktionen, Chemotaxis und das Zellüberleben in sauren Mikroumgebungen moduliert. Durch die Kopplung des extrazellulären pH-Werts an die GPCR-Signalübertragung beeinflusst TDAG8 Stressantwort-Signalwege und Zytokinnetzwerke, die für Gewebeentzündungen und tumorassoziierte Azidose relevant sind. Veränderte GPR65-Aktivität wurde im Zusammenhang mit Immunfehlregulation und durch die Mikroumgebung getriebenen Phänotypen untersucht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in der GPCR- und pH-Sensorik-Biologie stützt.

Das TDAG8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPR65-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPR65-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPR65 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TDAG8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPR65-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TDAG8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPR65-Exone abzielen, die für die TDAG8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPR65-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TDAG8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TDAG8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPR65-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TDAG8 HDR-Plasmid (h) und TDAG8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPR65-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPR65-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.