TCTE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423316

Übersicht

Tcte2 kodiert TCTE2, ein mit Zilien und Flagellen assoziiertes Protein, das an der Assemblierung und Funktion motiler Axoneme in Mauszellen beteiligt ist. Durch die Unterstützung des dyneinvermittelten Gleitens von Mikrotubuli und des koordinierten Zilienschlags trägt TCTE2 zu Prozessen wie der Spermatidenreifung und der Spermienmotilität bei und ist damit mit der Reproduktionsbiologie und der Ziliogenese verknüpft. Störungen von Komponenten motiler Zilien können allgemein die mukoziliäre Clearance, den Fluss der Cerebrospinalflüssigkeit und die Links-Rechts-Patterning beeinflussen, wodurch TCTE2 für mechanistische Studien zu Ziliopathien relevant wird. TCTE2 eignet sich daher zur Untersuchung der axonemalen Organisation, der mit dem intraflagellären Transport verbundenen Homöostase sowie zelltypspezifischer Folgen eingeschränkter Motilität.

Das TCTE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tcte2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tcte2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tcte2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TCTE2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tcte2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TCTE2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tcte2-Exone abzielen, die für die TCTE2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tcte2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TCTE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TCTE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tcte2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TCTE2 HDR-Plasmid (m) und TCTE2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tcte2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tcte2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.