Plásmido CRISPR de Activación (h) TCP-1 ζ2: sc-403048-ACT

CCT6B codifica la subunidad zeta 2 del chaperonina que contiene TCP1 en humanos (TCP-1 ζ2), un componente del complejo citosólico TRiC/CCT que media el plegamiento dependiente de ATP de proteínas recién sintetizadas y de proteínas desnaturalizadas por estrés. Este complejo es fundamental para la proteostasis al ayudar a la maduración de proteínas del citoesqueleto como la actina y la tubulina y al coordinar el control de calidad proteico con la progresión del ciclo celular. A través de su función en el plegamiento y el ensamblaje de complejos de múltiples subunidades, TCP-1 ζ2 influye en vías relacionadas con la dinámica del citoesqueleto, el transporte intracelular y las respuestas celulares al estrés. La desregulación de la actividad de las chaperoninas se estudia con frecuencia en contextos de estrés proteotóxico, proliferación alterada y remodelación a nivel de sistemas observada en investigaciones sobre cáncer y neurodegeneración.

TCP-1 ζ2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCT6B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TCP-1 ζ2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCT6B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCT6B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TCP-1 ζ2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCT6B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TCP-1 ζ2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TCP-1 ζ2 en células tumorales con expresión de CCT6B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.