TCF-19 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404549-ACT

TCF19 (TCF-19) ist ein nukleärer Transkriptionsfaktor, der an der Regulation des Fortschreitens des Zellzyklus sowie an proliferationsassoziierten Transkriptionsprogrammen beteiligt ist; es wurde eine Aktivität an Promotorregionen von Genen beschrieben, die an DNA-Replikation und Checkpoint-Kontrolle beteiligt sind. TCF19 wird in proliferativen Kontexten exprimiert und mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die den Eintritt in die S-Phase und eine chromatinabhängige Genregulation steuern. Eine veränderte TCF19-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Situationen beobachtet, darunter in transkriptomischen Signaturen von Krebserkrankungen und bei immunbezogenen Phänotypen, was auf Rollen in der Wachstumskontrolle und der Anpassung an zellulären Stress hindeutet. Diese Eigenschaften machen TCF19 zu einem nützlichen Ziel, um Transkriptionsnetzwerke zu untersuchen, die Proliferation, Genomstabilität und kontextspezifische Genexpression koordinieren.

TCF-19 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TCF19-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TCF-19 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TCF19-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TCF19-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TCF-19-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TCF19-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TCF-19-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TCF-19-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TCF19-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.