Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TCF-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423299-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TCF-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TCF-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und TCF-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Tcf7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TCF-1: sc-271453
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TCF-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TCF-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Tcf7 kodiert den Transkriptionsfaktor T‑Zell‑Faktor 1 (TCF‑1), einen zentralen Effektor der kanonischen Wnt/β‑Catenin‑Signalübertragung, der an TCF/LEF‑Motive bindet und Genprogramme reguliert, welche die Lymphozytenentwicklung, stammzellähnliche Selbsterneuerungszustände und die Linienfestlegung steuern. In murinen Immunzellen prägt TCF‑1 die Reifung von Thymozyten und die Differenzierung peripherer T‑Zellen, indem es Chromatinzugänglichkeit und Transkriptionsnetzwerke koordiniert, die Signale aus Wnt‑, Notch‑ und Zytokin‑Signalwegen integrieren. Eine fehlregulierte TCF‑1‑Aktivität wird mit veränderter Immunhomöostase und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht; aufgrund seiner Funktionen auf Signalwegebene ist es zudem für Studien zur Tumorimmunologie und zur hämatopoetischen Regulation relevant. Als nukleärer, DNA‑bindender Regulator wird TCF‑1 außerdem als Knotenpunkt genutzt, um kontextspezifische transkriptionelle Schaltkreise und epigenetische Kontrolle in Entwicklungs- und Krankheitsmodellen zu untersuchen.
TCF-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tcf7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tcf7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tcf7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tcf7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.