Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO TC-PTP (m): sc-422509
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TC-PTP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TC-PTP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TC-PTP Antibody (D-3): sc-398997
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TC-PTP (m) | sc-422509 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin Ptpn2 code la phosphatase tyrosine des protéines des cellules T (TC-PTP), une PTP non réceptrice qui déphosphoryle des intermédiaires clés de la signalisation afin de freiner les voies des cytokines et des facteurs de croissance. La TC-PTP régule négativement la signalisation JAK/STAT et peut moduler des événements de phosphorylation associés au récepteur de l’insuline et à l’EGFR, façonnant des programmes transcriptionnels qui contrôlent la prolifération, la survie et l’activation immunitaire. Grâce à ces fonctions, Ptpn2 contribue au maintien de l’homéostasie immunitaire et de l’intégrité de la barrière épithéliale, et sa dérégulation a été associée à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns ainsi qu’à une signalisation liée aux tumeurs altérée dans des modèles expérimentaux. En conséquence, Ptpn2 est largement étudié pour comprendre les mécanismes de réponse aux cytokines, les seuils de signalisation des cellules T et la biologie des maladies induites par l’inflammation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TC-PTP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ptpn2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ptpn2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ptpn2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TC-PTP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ptpn2 pour l'étude de la signalisation de TC-PTP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ptpn2 essentiels à la fonction de TC-PTP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ptpn2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TC-PTP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TC-PTP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ptpn2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TC-PTP plasmide HDR (m) et le TC-PTP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ptpn2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ptpn2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.