TBX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423282

概要

Tbx5は、T-box型転写因子TBX5をコードしており、マウスにおいて前肢のパターニングおよび心臓形態形成を制御する発生関連遺伝子プログラムを統括する、配列特異的なDNA結合性転写制御因子である。TBX5は、NKX2-5、GATA4、ならびにMEF2ファミリー因子を含む中核的な転写ネットワークと連携し、中胚葉由来組織におけるエンハンサー活性と系譜特異化を調節する。その活性は、心腔形成、刺激伝導系の発達、心筋細胞の分化を司る経路に影響し、Tbx5の発現量（用量）の変動は先天性の心臓および四肢の形成異常表現型と関連する。標的が文脈依存的に変化する発生制御因子として、TBX5は器官形成や細胞運命決定における転写制御の研究に広く用いられている。

TBX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTbx5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tbx5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tbx5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TBX5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TBX5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tbx5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TBX5の機能に不可欠なTbx5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tbx5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TBX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTBX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tbx5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TBX5 HDRプラスミド（m）および TBX5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTbx5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTbx5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。