Plásmido CRISPR de Activación (h) TBL1Y: sc-404389-ACT

TBL1Y codifica una proteína similar a la subunidad beta de la transducina ligada al cromosoma Y que funciona como componente de la maquinaria correpresora transcripcional NCoR/SMRT, ayudando a acoplar programas de represión y activación asociados a la cromatina con la regulación génica dependiente de señales. A través de interacciones con enzimas modificadoras de histonas y factores de transcripción, los complejos relacionados con TBL1Y influyen en la transcripción mediada por la ARN polimerasa II, la señalización de receptores nucleares y la dinámica de la expresión génica durante el desarrollo. Aunque está menos caracterizado que el parálogo TBL1XR1, las proteínas de la familia TBL1 están ampliamente implicadas en vías que gobiernan decisiones de destino celular, señalización inflamatoria y reprogramación oncogénica de la transcripción. El estudio de TBL1Y respalda investigaciones sobre redes regulatorias ligadas al sexo, la biología de corre reguladores transcripcionales y la desregulación de la expresión génica dependiente de la cromatina en contextos relevantes para la enfermedad.

TBL1Y El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBL1Y sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TBL1Y El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBL1Y en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBL1Y, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TBL1Y. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBL1Y y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TBL1Y en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TBL1Y en células tumorales con expresión de TBL1Y silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.