TAZ Double Nickase Plasmid (h): sc-400320-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TAZ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TAZ Double-Nickase-Plasmid (h) und TAZ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WWTR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TAZ: sc-293183
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TAZ Double Nickase Plasmid (h) | sc-400320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TAZ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WWTR1 kodiert den transkriptionellen Koaktivator TAZ (TAZ/WWTR1), einen zentralen nachgeschalteten Effektor des Hippo-Signalwegs, der mechanische Signale, Zellpolarität und GPCR-Inputs integriert, um Genexpressionsprogramme zu regulieren, die Proliferation, Überleben, Differenzierung und die epithelial–mesenchymale Plastizität steuern. TAZ pendelt in Abhängigkeit von der durch LATS1/2 vermittelten Phosphorylierung zwischen Zytoplasma und Zellkern und bildet mit Transkriptionsfaktoren der TEAD-Familie Partnerschaften, um Zielgene zu modulieren, die an Gewebewachstum und dem Umbau der extrazellulären Matrix beteiligt sind. Eine fehlregulierte TAZ-Aktivität wurde mit veränderter Kontaktinhibition und aberranten stammzellähnlichen Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, was WWTR1 zu einem häufig untersuchten Knotenpunkt in Studien zur Krebsbiologie, zu fibroseassoziierter Signalgebung und zur Organentwicklung macht. Sein Crosstalk mit Wnt/β-Catenin-, TGF-β/SMAD- und Mechanotransduktionswegen unterstreicht zusätzlich seine Relevanz für die Analyse kontextabhängiger transkriptioneller Kontrolle.
TAZ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WWTR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WWTR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WWTR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WWTR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.