Partículas Lentivirales de Activación (h) TARSL1: sc-410152-LAC

TARS2 codifica la treonil‑ARNt sintetasa mitocondrial TARSL1, una ligasa aminoacil‑ARNt necesaria para cargar el ARNtThr mitocondrial y mantener la traducción de las subunidades de la fosforilación oxidativa (OXPHOS) codificadas por el ADN mitocondrial (ADNmt). Al sostener la síntesis de proteínas mitocondriales, TARSL1 contribuye al ensamblaje de la cadena respiratoria, a la producción de ATP y a respuestas integradas de estrés mitocondrial que modulan el metabolismo y las decisiones sobre el destino celular. La alteración de la traducción mitocondrial se asocia estrechamente con una bioenergética deficiente, cambios en la homeostasis redox y la activación de vías de señalización compensatorias, lo que hace que la función de TARS2/TARSL1 sea relevante para estudios de disfunción mitocondrial en la neurodegeneración, las enfermedades cardiometabólicas y el metabolismo del cáncer. Como componente central de la expresión génica mitocondrial, TARSL1 también ofrece un punto de entrada mecanístico para investigar la comunicación mitonuclear y el control translacional en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TARSL1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TARS2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TARSL1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TARS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TARSL1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TARS2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.