Plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP2 (m): sc-423266

Présentation

Tap2 code chez la souris le transporteur associé au traitement des antigènes 2 (TAP2), un transporteur de la famille des cassettes de liaison à l’ATP (ABC) qui forme un hétérodimère avec TAP1 afin de transloquer, depuis le cytosol vers le réticulum endoplasmique, des peptides issus du protéasome pour leur chargement sur les molécules du CMH de classe I. Cette activité est au cœur du traitement et de la présentation de l’antigène, reliant le renouvellement ubiquitine–protéasome, le chargement des peptides dans le RE et la surveillance immunitaire des lymphocytes T CD8+. La fonction de TAP2 s’intègre au complexe de chargement des peptides et influence la qualité et la diversité de l’immunopeptidome du CMH I, modulant ainsi les réponses à l’infection et au stress d’origine immunitaire. Une activité altérée de TAP2 a été associée à une diminution de l’expression du CMH I à la surface cellulaire et à des phénotypes d’échappement immunitaire pertinents pour la biologie de l’inflammation et la recherche en immunologie des cancers.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tap2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tap2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tap2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TAP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tap2 pour l'étude de la signalisation de TAP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tap2 essentiels à la fonction de TAP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tap2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tap2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TAP2 plasmide HDR (m) et le TAP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tap2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tap2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.