Plasmide Double Nickase (h) TAP1: sc-405210-NIC

TAP1 (transporteur associé au traitement des antigènes 1) code un transporteur de la famille des cassettes de liaison à l’ATP (ABC) qui forme un hétérodimère avec TAP2 afin de transloquer des peptides issus du protéasome du cytosol vers le réticulum endoplasmique, où ils sont chargés sur les molécules du CMH de classe I. Ce processus est au cœur du traitement et de la présentation de l’antigène, en reliant la signalisation induite par les interférons, l’activité de l’immunoprotéasome et la fonction du complexe de chargement des peptides du RE à la surveillance immunitaire des lymphocytes T CD8+. Une expression ou une fonction altérée de TAP1 est associée à une présentation de surface du CMH I diminuée et à des phénotypes d’échappement immunitaire observés dans de multiples contextes tumoraux, ainsi qu’à des caractéristiques d’immunodéficience primaire dans de rares défauts de présentation des antigènes. TAP1 est donc fréquemment étudié dans les voies impliquées dans les interactions hôte–pathogène, l’immunologie tumorale et les mécanismes régulant l’assemblage et le trafic du CMH I.

TAP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TAP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.