Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424683
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TAP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TAP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TAP Anticuerpo (53H8): sc-32319
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424683 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Nxf1** codifica **TAP**, un receptor de exportación de ARN conservado con capacidad de unión a ARN que se asocia con **NXT1** para impulsar el transporte masivo de ARNm desde el núcleo al citoplasma a través del complejo del poro nuclear. TAP reconoce partículas maduras de ribonucleoproteína mensajera mediante interacciones con complejos adaptadores como **TREX** y contribuye a acoplar la transcripción, el empalme (splicing) y el procesamiento del extremo 3′ con la exportación nuclear. Al controlar la disponibilidad de transcritos para la traducción, **Nxf1** influye en la proteostasis, la progresión del ciclo celular y los programas de expresión génica sensibles al estrés. La alteración de la maquinaria de exportación de ARNm se asocia con una expresión génica desregulada en la biología del cáncer y con mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, lo que convierte a **Nxf1** en un nodo útil para estudiar patologías vinculadas al metabolismo del ARN.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TAP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nxf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nxf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nxf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TAP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nxf1 para la investigación de la señalización de TAP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Nxf1 críticos para la función de TAP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nxf1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TAP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TAP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nxf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TAP (m) y el plásmido HDR TAP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nxf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nxf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.