Plasmide CRISPR d'Activation (h) Talin: sc-400783-ACT

Le gène humain TLN2 code la taline-2, un grand adaptateur du cytosquelette qui relie les queues cytoplasmiques des intégrines β à la F‑actine, favorisant l’assemblage des adhésions focales et convertissant les signaux mécaniques en signaux intracellulaires. En régulant l’activation des intégrines, la génération de forces de traction et le renouvellement des adhérences, la taline-2 influence la migration cellulaire, l’architecture tissulaire et des voies mécanoréactives qui recoupent la signalisation FAK/Src et celle des GTPases de la famille Rho. L’activité de TLN2 est particulièrement pertinente dans les contextes nécessitant une adhérence robuste et une transmission efficace des forces, notamment en biologie musculaire et cardiaque, et sa dérégulation a été associée à une motilité cellulaire altérée et à des phénotypes invasifs dans des systèmes modèles de cancer. Ces propriétés font de TLN2 une cible utile pour étudier la signalisation dépendante des adhérences, le remodelage du cytosquelette et les programmes transcriptionnels pilotés par la mécanotransduction.

Talin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Talin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Talin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Talin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Talin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.