Talin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400783-ACT

Il gene umano TLN2 codifica talina-2, un grande adattatore citoscheletrico che collega le code citoplasmatiche delle integrine β alla F-actina, promuovendo l’assemblaggio delle adesioni focali e convertendo stimoli meccanici in segnali intracellulari. Regolando l’attivazione delle integrine, la generazione di forze di trazione e il turnover delle adesioni, talina-2 influenza la migrazione cellulare, l’architettura dei tessuti e vie meccanosensibili che intersecano la segnalazione FAK/Src e delle GTPasi Rho. L’attività di TLN2 è particolarmente rilevante in contesti che richiedono un’adesione robusta e una trasmissione efficiente della forza, inclusi la biologia muscolare e cardiaca, e la sua disregolazione è stata associata ad alterata motilità cellulare e a fenotipi invasivi in sistemi modello di cancro. Queste proprietà rendono TLN2 un bersaglio utile per studiare la segnalazione dipendente dall’adesione, il rimodellamento del citoscheletro e programmi trascrizionali guidati dalla meccanotrasduzione.

Talin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TLN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Talin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TLN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TLN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Talin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TLN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Talin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Talin-2 nelle cellule tumorali con espressione di TLN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.