Plasmide Double Nickase (h) TACE/ADAM17: sc-400827-NIC

ADAM17, également connu sous le nom de TACE, est une métalloprotéase ancrée à la membrane qui catalyse le clivage (shedding) de l’ectodomaine de diverses protéines de surface cellulaire, dont le TNF, des ligands de l’EGFR (p. ex. le TGF-α et l’amphiréguline), ainsi que de multiples molécules d’adhérence et récepteurs. Par ce traitement protéolytique, TACE/ADAM17 module la signalisation inflammatoire, l’activation de la voie EGFR/MAPK et la communication intercellulaire, influençant la prolifération, la survie et le recrutement des cellules immunitaires. L’activité d’ADAM17 est étroitement régulée par sa maturation dans la voie sécrétoire et son trafic à la membrane plasmique, et elle participe à des réponses coordonnées aux cytokines, au stress et aux facteurs de croissance. Un shedding dépendant d’ADAM17 dérégulé a été impliqué dans l’inflammation chronique, la signalisation associée au cancer, le remodelage cardiovasculaire et les processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques sur la disponibilité des récepteurs/ligands et la dynamique des voies en aval.

TACE/ADAM17 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADAM17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADAM17. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADAM17. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADAM17.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.