T1R1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403768-ACT

O gene humano **TAS1R1** codifica a subunidade **T1R1** do recetor heterodimérico do gosto **umami** (normalmente em parceria com **TAS1R3**), que deteta **L-aminoácidos** e ligandos relacionados. Como um **GPCR de classe C**, o T1R1 acopla-se à transdução do paladar e a redes mais amplas de sinalização quimiossensorial que modulam a dinâmica do cálcio intracelular e vias a jusante de segundos mensageiros. Para além da gustação, a expressão de **TAS1R1/T1R3** em tecidos extraorais sustenta a investigação sobre deteção de nutrientes, regulação metabólica e sinalização epitelial. Alterações na atividade de recetores quimiossensoriais têm sido estudadas no contexto de comportamentos alimentares e fenótipos metabólicos, tornando o **TAS1R1** um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos celulares.

T1R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAS1R1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

T1R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAS1R1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAS1R1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de T1R1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAS1R1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de T1R1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via T1R1 em células tumorais com expressão de TAS1R1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.