T-bet/TBX21 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400480-NIC

TBX21はT-betをコードしており、T-betはT-box型転写因子として、IFNGの発現を促進し、Th1系譜へのコミットメントを強化すると同時に、他のヘルパーT細胞への分化運命を拮抗的に抑えることで、1型免疫プログラムを統括します。T-betは、IL-12/STAT4やIFN-γ/STAT1など、サイトカインおよび抗原受容体シグナル伝達経路の下流からのシグナルを統合し、CD4+およびCD8+T細胞、さらにNK細胞におけるクロマチンのアクセシビリティと転写ネットワークを形成します。エフェクター分化、細胞傷害機能、炎症性サイトカインのバランスを制御することから、TBX21は慢性感染、腫瘍免疫生物学、免疫介在性炎症疾患といった文脈で広く研究されています。TBX21の活性や発現の破綻は、異常な免疫極性化や組織炎症の変化と関連しており、免疫調節の機序解明研究における有用な結節点（ノード）とされています。

T-bet/TBX21 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TBX21 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TBX21内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TBX21の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TBX21が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。