SYT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401575-ACT

SS18, também conhecido como SYT, codifica um correpressor/co-regulador transcricional nuclear que se associa a complexos de remodelamento de cromatina SWI/SNF (BAF) para influenciar a acessibilidade de enhancers e promotores. Por meio dessas interações, o SS18 ajuda a coordenar programas de transcrição dependentes da RNA polimerase II ligados à identidade celular, diferenciação e proliferação. O SS18 é relevante em doenças porque rearranjos recorrentes envolvendo SS18 podem reprogramar a regulação da cromatina e ativar de forma aberrante a expressão gênica incompatível com a linhagem, tornando-o um nó-chave para estudar dependências transcricionais oncogênicas. Sua função é comumente investigada no contexto do remodelamento de cromatina, do controle do estado epigenético e da dinâmica de redes de fatores de transcrição.

SYT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SS18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SYT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SS18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SS18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SYT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SS18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SYT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SYT em células tumorais com expressão de SS18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.