Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin II (m): sc-423244
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Synaptotagmin II Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Synaptotagmin II, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Synaptotagmin II Antibody (26): sc-136089
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin II (m) | sc-423244 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Syt2 code la synaptotagmine II, une protéine membranaire liant le Ca2+ qui agit comme un capteur rapide essentiel du Ca2+ pour l’exocytose des vésicules synaptiques et la libération synchrone de neurotransmetteurs. Via ses domaines C2, la synaptotagmine II couple l’entrée de Ca2+ induite par le potentiel d’action à la fusion membranaire dépendante des SNARE, modulant la probabilité de libération présynaptique et la plasticité à court terme. Dans les neurones et les jonctions neuromusculaires de la souris, l’expression de Syt2 est étroitement associée à une transmission rapide dans des circuits définis et des voies motrices. La dérégulation de la fusion vésiculaire déclenchée par le Ca2+ et des mécanismes de libération présynaptique est largement pertinente pour les études de neurophysiologie et des mécanismes des maladies neurologiques, où le dysfonctionnement synaptique constitue une caractéristique centrale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin II (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Syt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Syt2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Syt2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synaptotagmin II.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Syt2 pour l'étude de la signalisation de Synaptotagmin II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Syt2 essentiels à la fonction de Synaptotagmin II
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Syt2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Synaptotagmin II plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Synaptotagmin II plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Syt2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Synaptotagmin II plasmide HDR (m) et le Synaptotagmin II (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Syt2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Syt2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.