Synaptojanin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411221-ACT

SYNJ2 codifica a sinaptojanina 2, uma fosfatase de polifosfoinositídeos que hidrolisa PI(4,5)P2 e fosfoinositídeos relacionados para regular a identidade e o tráfego de membranas. Ao controlar a endocitose mediada por clatrina, a reciclagem endossomal e a dinâmica do citoesqueleto de actina, a sinaptojanina 2 ajuda a coordenar a internalização de receptores e a saída de sinalização na membrana plasmática. Sua atividade conecta a renovação de fosfoinositídeos a vias que governam migração celular, adesão e dinâmica de vesículas, processos frequentemente investigados em biologia do câncer e neurobiologia. Alterações na expressão ou na função de SYNJ2 têm sido associadas a desregulação do tráfego de receptores e a fenótipos invasivos, sustentando sua relevância em estudos de remodelamento celular dependente de sinalização.

Synaptojanin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYNJ2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synaptojanin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYNJ2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYNJ2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synaptojanin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYNJ2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synaptojanin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synaptojanin 2 em células tumorais com expressão de SYNJ2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.