Plásmido CRISPR de Activación (h) SVCT1: sc-403006-ACT

SLC23A1 codifica el transportador humano de vitamina C 1 dependiente de sodio (SVCT1), un simportador de membrana plasmática que media la captación de alta capacidad de L-ascorbato acoplada a gradientes de sodio. La actividad de SVCT1 respalda la homeostasis redox celular al mantener reservas intracelulares de ascorbato que influyen en la defensa antioxidante, la hidroxilación del colágeno y la regulación epigenética dependiente de dioxigenasas. En tejidos epiteliales como el intestino y el riñón, SVCT1 contribuye a la absorción dietaria y a la reabsorción renal de vitamina C, determinando la disponibilidad sistémica de ascorbato. La función o expresión alteradas de SLC23A1 se han investigado en contextos de susceptibilidad al estrés oxidativo y de fenotipos metabólicos e inflamatorios, en los que el transporte de vitamina C puede modular vías de señalización de respuesta al estrés.

SVCT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC23A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SVCT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC23A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC23A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SVCT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC23A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SVCT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SVCT1 en células tumorales con expresión de SLC23A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.