Plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-2 (m): sc-423220

Présentation

Surf2 code pour SURF-2, une protéine nucléaire conservée du cluster de gènes « surfeit », associée à des mécanismes fondamentaux de contrôle de l’expression génique. SURF-2 est impliquée dans la régulation transcriptionnelle dépendante de l’ARN polymérase II ainsi que dans des processus liés à la chromatine qui influencent l’homéostasie cellulaire. La perturbation des réseaux régulateurs associés à SURF-2 peut affecter la prolifération, les réponses au stress et les programmes de différenciation, faisant de Surf2 un nœud utile pour l’étude de la maintenance du génome et de l’amortissement transcriptionnel. Une expression altérée des gènes du cluster surfeit a été observée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, ce qui soutient l’exploration mécanistique de Surf2 dans des états d’expression génique dérégulée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Surf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Surf2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Surf2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SURF-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Surf2 pour l'étude de la signalisation de SURF-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Surf2 essentiels à la fonction de SURF-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Surf2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SURF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SURF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Surf2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SURF-2 plasmide HDR (m) et le SURF-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Surf2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Surf2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.