Plásmido Doble Nickase (h) Superoxide Dismutase 2/SOD2: sc-400230-NIC

La SOD2 humana codifica la superóxido dismutasa mitocondrial de manganeso, una defensa enzimática primaria frente a los radicales superóxido generados por la fosforilación oxidativa. Al convertir el superóxido en peróxido de hidrógeno, SOD2 ayuda a mantener la homeostasis redox mitocondrial, respalda la función de la cadena de transporte de electrones y limita el daño oxidativo al ADNmt, las proteínas y los lípidos. La actividad de SOD2 se integra con vías antioxidantes y de respuesta al estrés, incluidas la desintoxicación regulada por NRF2 y procesos de control de calidad mitocondrial como la mitofagia y la señalización de apoptosis. La expresión desregulada de SOD2 o su actividad deteriorada se asocia con fenotipos de estrés oxidativo observados en el metabolismo del cáncer, la neurodegeneración, la cardiomiopatía y los trastornos inflamatorios, lo que la convierte en un objetivo frecuente para estudios mecanísticos de la disfunción mitocondrial.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SOD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SOD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SOD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SOD2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.