Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMO-1 (m): sc-423588

Présentation

Sumo1 code SUMO‑1, un modificateur de type ubiquitine qui est conjugué de manière covalente à des résidus lysine sur des protéines cibles afin de réguler leur localisation, leur stabilité et leurs réseaux d’interactions. La SUMOylation influence de nombreux processus cellulaires, notamment la signalisation et la réparation des dommages à l’ADN, l’organisation de la chromatine, le contrôle transcriptionnel, le transport nucléaire et la progression du cycle cellulaire, via des cascades enzymatiques coordonnées E1–E2–E3 et des protéases spécifiques des SUMO. La modification par SUMO‑1 interfère souvent avec la dégradation dépendante de l’ubiquitine et les voies de réponse au stress, modulant la protéostasie et la dynamique des signaux dans le noyau et le cytoplasme. Une SUMOylation dérégulée a été associée à des mécanismes pertinents pour la biologie du cancer, la neurodégénérescence et la régulation immunitaire, faisant de Sumo1 un nœud utile pour des études de voies dans des modèles murins et des systèmes cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMO-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sumo1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sumo1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sumo1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUMO-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sumo1 pour l'étude de la signalisation de SUMO-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sumo1 essentiels à la fonction de SUMO-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sumo1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUMO-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SUMO-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sumo1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUMO-1 plasmide HDR (m) et le SUMO-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sumo1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sumo1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.