Plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1A1 (m): sc-423199

Présentation

Le gène murin **Sult1a1** code la sulfotransférase cytosolique **SULT1A1**, une enzyme de phase II du métabolisme des xénobiotiques qui catalyse la sulfonation de composés phénoliques en utilisant la **3′-phosphoadénosine-5′-phosphosulfate (PAPS)** comme donneur de sulfate. Cette réaction augmente la polarité des substrats, ce qui influence leur élimination cellulaire, leur biodisponibilité et leur réactivité chimique, et s’intègre à des réseaux plus larges de détoxification incluant l’oxydation par les cytochromes P450 et les voies de conjugaison. L’activité de SULT1A1 module la prise en charge hépatique et extra-hépatique de constituants alimentaires, de substances chimiques environnementales et de certaines molécules de signalisation, affectant ainsi les réponses au stress oxydant et la signalisation dépendante des métabolites. Une capacité de sulfatation altérée a été associée à une variabilité de la sensibilité aux toxiques et à des lésions tissulaires liées à l’inflammation dans des modèles pertinents pour la physiologie du foie et du tractus gastro-intestinal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1A1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sult1a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sult1a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sult1a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SULT1A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sult1a1 pour l'étude de la signalisation de SULT1A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sult1a1 essentiels à la fonction de SULT1A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sult1a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SULT1A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SULT1A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sult1a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SULT1A1 plasmide HDR (m) et le SULT1A1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sult1a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sult1a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.