Plásmido Doble Nickase (h) Sulf-2: sc-403277-NIC

SULF2 codifica Sulf-2, una 6-O-endosulfatasa extracelular que remodela los proteoglicanos de sulfato de heparán mediante la eliminación selectiva de grupos 6-O-sulfato. Al reconfigurar los patrones de sulfatación del sulfato de heparán, Sulf-2 modula la disponibilidad de ligandos y la interacción con receptores en vías de señalización clave, incluidas FGF, Wnt, BMP y Hedgehog, e influye en la proliferación celular, la migración y la remodelación tisular. Las alteraciones en la expresión o la actividad de SULF2 se han asociado con una señalización desregulada de la matriz extracelular y se han estudiado en el contexto de la biología tumoral, la fibrosis y los procesos inflamatorios. Estas funciones convierten a SULF2 en una diana útil para analizar cómo la edición del sulfato de heparán controla los gradientes de factores de crecimiento y los programas transcripcionales aguas abajo.

Sulf-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SULF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SULF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SULF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SULF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.