Plasmide CRISPR d'Activation (h) STAU1: sc-402630-ACT

La STAU1 (Staufen1) humaine est une protéine se liant à l’ARN double brin qui régule l’expression génique post‑transcriptionnelle en contrôlant le transport, la localisation, la traduction et la dégradation des ARNm. Elle constitue un facteur central de la dégradation des ARNm médiée par Staufen (SMD), en coordonnant les interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques afin de moduler la stabilité des transcrits et la production du protéome. STAU1 relie également le métabolisme de l’ARN aux réponses au stress cellulaire, à l’organisation du cytosquelette et à la progression du cycle cellulaire via ses rôles dans la dynamique des granules d’ARN et le contrôle translationnel. Une activité dérégulée de STAU1 a été associée à des altérations de l’homéostasie de l’ARN observées dans des phénotypes liés au cancer et aux neurosciences, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier des réseaux de régulation génique pertinents pour les maladies.

STAU1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STAU1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STAU1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STAU1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STAU1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STAU1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STAU1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STAU1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STAU1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STAU1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.