St3Gal-I Double Nickase Plasmid (m): sc-422935-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das St3Gal-I Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- St3Gal-I Double-Nickase-Plasmid (m) und St3Gal-I Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf St3gal1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
St3Gal-I Double Nickase Plasmid (m) | sc-422935-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
St3Gal-I Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422935-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **St3gal1** kodiert die im Golgi-Apparat lokalisierte Sialyltransferase **St3Gal-I**, die die Übertragung von Sialinsäure in **α2,3-Bindung** auf **Galβ1-3GalNAc** von Core-1‑O‑Glykanen katalysiert und damit den Sialylierungszustand mucinartiger Glykoproteine prägt. Durch die Modulation terminaler Glykanstrukturen beeinflusst St3Gal-I die Stabilität von Glykoproteinen, Rezeptor‑Ligand‑Interaktionen sowie Zell‑Zell‑ bzw. Zell‑Matrix‑Adhäsionsprozesse, die für Immunregulation und Epithelbiologie zentral sind. Das Enzym ist ein wesentlicher Bestandteil von O‑Glykosylierungswegen, die Membrantransport und Signal-Mikroumgebungen beeinflussen, mit nachgelagerten Auswirkungen auf Entzündung und tumorassoziiertes Glykan-Remodeling. Veränderte **ST3GAL1**-Aktivität und **α2,3‑sialylierte Epitope** werden häufig in Kontexten wie der Entwicklung von Immunzellen, metastaseassoziierter Adhäsion und Mechanismen der glykanvermittelten Immunflucht untersucht.
St3Gal-I Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des St3gal1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von St3gal1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die St3gal1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit St3gal1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.